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钝齿棒杆菌AS1.998原生质体形成与再生条件的研究_论文

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维普资讯 http://www.cqvip.com 钝 齿 棒杆 菌 AS . 9 1 9 8原 生质 体 形成 与再 生 条 件 的研 究  刘 晓 波 , 宗 伟 , 晓兵 , 李 丁 闰世 梁 , 广 雍  秦 ( 州 大学 离 子 束 生 物 工 程 省 重 点 实 验 室 , 南 郑 州 ,50 2  郑 河 405) 摘  要  研 究 了影 响 L 异 亮 氨 酸 ( —s l c e 产 生 菌 钝 齿 棒 杆 菌 ( o y ea t i m c e au A 1 9 8原 生质  一 L Ioe i ) u n C r n b ce u  rn t m) S . 9 r 体 形 成 和 再 生 的各 个 因 素 。 结果 表 明 : 体 培 养 至对 数 生 长 期 , .  mL青 霉 素 G 处 理 3h后 ,.  / 的 菌 0 8U/   10mg mL   蛋 清 溶 菌 酶 3 " 10rmi 解 1  , 生 质 体 形 成 率 可 达 9 .  以 上 , 含 85 蔗 糖 的 再 生 完 全 培 养 基  7 C,5 / n酶 5h 原 8O 在 .  上 , 生 率 可达 2 .   ~ 3 .   。 再 00 O0   关 键 词  钝 齿 棒 杆 菌 AS . 9 , 生 质 体 , 成 率 与 再 生 率 , 一 亮 氨 酸  198原 形 L异 钝 齿 棒 杆 菌 ( .ce au AS . 9 C rn tm) 1 9 8是 1株 产  L 异 亮 氨酸 的菌 株 。L 异 亮 氨酸 具 有 促 进 体 内蛋 白 一 一   质、 酶和 肽类激 素合 成 、 增强 身体 免疫 力 的功能 , 氨  是 基 酸输 液 、 基 酸 口服 剂 的重 要 组 分  被 广 泛 运用  氨 ¨, 于 食 品 工 业 、 妆 品 、 料 添 加 剂 等 领 域[ ] 化 饲 2 。* 年  。 1 3 主 要 溶 液  . 1 3 1 高渗缓 冲液 ( / ) . .  g L  丁二 酸 钠 4 . 4 蔗 糖 1 0 0 Mg 1 4 0 , H 25 , 7 . , C2 . 6 p     6 7, 1 ℃ , 菌 2   n。 . 15 灭 0 mi   1 3 2 蛋 清 溶 菌 酶 溶 液  .. 来, 以原生 质体 为对 象获 得高 产菌 株 的选 育 方法 越来  越 引起广 大研 究工作 者 的重视 。   自 15 9 3年 Web l 首 次用 溶 菌 酶 得 到 巨大 芽  iul [ 孢杆 菌 ( a i u  g tru 原 生质体 之后 , 们开  B cl s l me a eim) 人 始对原 生质体 的形 成 和再 生进 行 广 泛 地 研 究 。但 不  同微 生物对 溶菌 酶 的敏 感 性 不 同 , 菌 酶 浓 度 、 解  溶 酶 温度及 时 间等 因素也影 响原 生质 体形 成 和再 生 , 因此  探 索原 生质体 形成 和再 生 的最适 条件 , 于 以原生 质  对 用 高渗缓 冲液 配制 1 0mg mL的蛋 清溶 菌酶溶  .  / 液, 细菌过 滤 器过滤 除 菌 。   1 3 3 青霉 素 G 钠 盐溶 液  ..  用无 菌水 配 制 1 0U/ 0  mL的青 霉 素 G 钠 盐 ( 0 8  万 单 位) 液 , 溶 现用 现配 。   1 4 菌 体 前 培 养  . 取 新鲜 活化 斜 面 菌种 1环 , 入 2    M 中 , 接 5mL C   3 ℃ ,0 / n振荡 培养 过 夜 , l 0 2 0rmi 取   mL菌液 转 接 至  体 为材 料 的遗 传及 工 业 育 种 的研 究 十分 重要 [ 。本  5 ] 文 对钝齿 棒状 杆菌 AS . 9 1 9 8原 生 质体 形 成 与再 生 条  件进 行 了系统 研究 。   2  5mL新 鲜 C 中 , 荡 培 养 5 5h 加入 青 霉 素 , M 振 .  , 继  续 培养 。   1 5 原 生 质 体 的 形 成  . 取上 述 经青 霉素 预处 理过 的菌 液 5mL,  0 /   45 0r  1 材 料 与 方 法    1 1 菌  种  .  mi , 心 1  n 弃 上 清 液 , 高 渗 缓 冲 液 洗 涤 2 n离 5 mi , 用   次, 配成 蛋清 溶菌 酶菌 悬 液 5mL。3    7C酶解 1 ~ 1  o 1 7 钝齿棒 杆 菌 ( C.ceau AS . 9 , 自 中 国  rn tm) 1 9 8 购 科学 院微生 物所 。   1 2 培 养 基  . 12 1 完全培 养基 ( M ,/ ) .. C g L  h 45 0rmi, 心 1  n 弃 上 清液 , 高渗 缓 冲  ,  0 / n 离 5mi, 用 液洗 涤 2次 , 配成 高渗 菌悬 液 5mL。     1 6 原 生 质 体 的 再 生  . 将 原 生质体 高 渗悬 浮液 以高 渗缓 冲液梯 度稀 释 ,   取 0 1mL稀 释 菌 液 均 匀 涂 布 HC * 板 , 0 , .  M 3 ℃ 培  养 2 3d  ~  。 葡萄糖 5 0 牛 肉膏 1 . , 白胨 1 . , 母 膏  ., 00蛋 00 酵 5 0 Na 1 . , . , C  5 琼脂 1 . , H 7 0 . , 1 ℃ , 菌  2 5 0 p   . ~7 2 1 5 灭 2   i   0 m n。 1 7 原 生 质体 形成 率和 再生 率 的计 算 [ . 6 ]   将 青霉 素处 理 后 , 菌 酶处 理 前 的 菌液 , 溶 以无 菌  水 梯度稀 释 , 0 1 取 . mL菌液 均匀涂 布 于 C * 板上 , M   3 ℃培 养 , 出的菌落



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